[AASLD2013]干扰素可直接诱导HBV cccDNA降解 2013-12-16
HBVcccDNA长期存在于肝细胞是慢性HBV感染的主要原因。干扰素(IFN)治疗慢性HBV感染临床应用广泛，目前已知其对于病毒有非细胞毒性清除作用，但具体机制不明，尤其对于干扰素是否直接作用于cccDNA模板尚不清楚。第64届AASLD年会上，德国学者Xia等报告，他们通过研究发现干扰素具有降解HBVcccDNA的能力，能摧毁HBV的转录模板。
研究者在感染HBV的人肝细胞以及HepaRG细胞系中，给予IFN-α和IFN-γ，可以发现HBVcccDNA显著减少。HBVcccDNA特异性3D-PCR检测显示，HBVcccDNA发生序列变化。序列分析则表明IFN-α和IFN-γ可以使HBVcccDNA负链中的C和U碱基发生转位。进一步分析IFN-α可能的作用机制，研究者发现IFN-α能上调这两种细胞的APOBEC3家族(A3)嘧啶胞苷脱氨酶A3A和A3G的表达，用IFN-α肝脏中，A3A和A3G的表达也呈现剂量时间依赖性变化。通过JAK-STAT信号通路的阻断或者HIV-vif表达也证实了IFN-α可以诱导HBVcccDNA被APOBEC3降解。细胞内细胞器定位分析及过表达显示A3A作为一个活化因子位于细胞核内。
研究者使用DNA修复酶纠正HBVcccDNA中所有突变后发现尿嘧啶可以被尿嘧啶DNA糖基化酶去除，遗留下无嘌呤/嘧啶(AP)位点。向IFN-α处理过的肝细胞中加入AP内切酶，HBVcccDNA含量下降，提示AP内切酶可降解cccDNA。通过3D-PCR以及深度测序，研究者没有发现宿主基因组DNA出现脱氨基化，提示A3A直接特异性作用于病毒DNA。
由于A3A和HBV核心蛋白(HBc)在共聚焦显微镜观察中处于相同的位置，并且在免疫共沉淀中相互作用，研究者推测A3A主要利用HBc接近cccDNA。研究者通过染色体共沉淀确认，HBc以及A3A都可以结合到cccDNA的微粒体结构上。在HBV(x-)感染中，IFN-α导致的cccDNA下降依赖与HBx的互补结合，而HBx是活化cccDNA转录以及HBc表达所必需的。
由于IFN-α需要大剂量应用才能清除病毒感染，研究者筛选了其他一些与IFN-α和IFN-γ具有类似抗病毒效用的细胞因子。结果发现，TNF-α和和活化的淋巴毒素β受体在治疗剂量下可以诱导cccDNA去氨基化并被降解，主要通过NF-κB依赖的途径剪切碱基。
这些学者的研究第一次说明cccDNA可以被IFN降解而不影响宿主细胞，同时为清除HBV以及治疗慢性乙型肝炎提供了安全的治疗新选择。