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HBVDNA的检验方法及指标、单位换算

更新时间:2002年08月01日00:00:00    作者:战胜乙肝网    文章来源:HBV论坛
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  目前检验病毒的方法,除去血清培养基方法(HIV, CMV, HBV等病毒很难在培养基中分离检验),大致有三种::

  pCR (polymerase chain reaction 或RT-PCR等),最常用的方法,很敏感,但误差大,价钱比较贵,通常单位用 copies/ml of plasma;

  bDNA (branched chain DNA assay), 也是目前常用的方法,敏感,常规化,结果比较稳定,价钱比较便宜,通常单位用 units/ml of plasma (pg/ml, fg/ml);

  NASBA (nucleic acid sequence-based amplification),不常用,很敏感,误差大,工时长,价钱最贵,通常单位用 units/ml of plasma (pg/ml, fg/ml);

  

  就HBVDNA而论,目前测验HBV DNA时通常要达到两个目的。一个是定性(qualitative),另外一个是定量(quantitative) 。

  HBVDNA定性的测验注重于HBVDNA的存在,它通常可以测到低于100copies/ml的病毒存在。当然还有更精确的方法,通常用于科研实验室中,可以测到更低的含量。 一般临床用的都可以测到1000-2000 copies/ml以上的精度。定性通常只给阴性、阳性的结果。

  另外一方面,定量的测定着重于HBV DNA量存在的多少。通常用于定量的极限在0.1-5 pg/ml (1 pg/ml = 283,000 copies/ml)之间。同样,更精确的仪器可以测到0.001-0.005 pg/ml的精度。国外常用 fg/ml 为单位。copies/ml 比 fg/ml, pg/ml 单位更小。fg/ml, pg/ml 显示定量比 (?) X 10?易懂不容易错。

  关于 copies/ml, pg/ml, fg/ml的换算大致如下:

  Picogram: 1 pg = 10-12 g= 10-9 mg= 10-6 mg= 10-3 ng= 103 fg

  Femtogram: 1 fg= 10-15 g= 10-12 mg= 10-9 mg= 10-6 ng= 10-3 pg

  1 pg/ml = 283,000 copies/ml

  HBVDNA正常指标

  HBVDNA的正常指标或标准可以说是"不能100%设定的。"

  定性测量的阳性通常说明病毒容易传染给他人, 阴性说明不容易传给他人。 一般讲血中测到少于1000copies/ml一下可为阴性。

  定量测验, 因为结果是数字的, 而不是"高低," "阴阳," "正常/不正常," 也就比较麻烦。确定正常值指标一定要知道所做实验的 "参考范围" (reference range)。 参考范围是因测验的仪器,方法,试剂,病人年龄,性别,条件等而定的。 如,目前一般生产应用的Ultra Sensitive Quantitative PCR (高灵敏度定量PCR) 法的测验参考范围是在:

  Less than 0.001 pg/mL

  Less than 2.3 log copies/mL

  Less than 200 copies/mL

  
Note: The reportable range is 0.001 to approximately 700 pg/mL, which is approximately equivalent to 2.3-8.3 log copies/mL (200 to 200,000,000 copies/ml)。

  就是说这种方法可以测到参考范围是在0.001 到 700 pg/ml间, 约合在2.3-8.3 log 拷贝/毫升(200-200,000,000 拷贝/毫升)间;但是不同方法,仪器,批量这个范围不同而正常值(对照)也就不同。 现在技术先进,人们可以在大量生产时人为地把这个范围弄稳定/固定。

  此外定量是根据拷贝/毫升决定多少而定。它只有量的定性! 只要测得到就是阳性,不是在一个病毒含量浓度没病,一个含量有病,何况测不到也不能说没病了 (下面细谈)。

  所以要想知道结果的正确与否,含量高低等应该和所做DNA单位索取所用方法及仪器的参考范围及标准值或正常对照值。

  查不到病毒DNA(Undetectable DNA)是不是就说明疾病治愈,不感染了?

  查不到病毒的DNA不能说明已经不感染疾病,或者是治愈了。查不到病毒可能是因为现有仪器和水平不能测到更精确程度。目前很好的仪器可以测到20copies/ml之低血中的病毒存在。但是就是低于20拷贝还是有病毒存在在那里,而且病毒可能存在除血清以外的液体,细胞等中。病毒变化是以log (10的次方)计算的,半个log变化都属于轻微的。

  测验HBV DNA的一点建议

  一个有经验的医生,第一次给病人测定DNA,用药或检查前,都会用两种不同的方法确定病毒的底线。之后,如果没有特别误差,最好是沿用一种方法。这样可以比较准的记录病毒量的变化。不会因为今天在地坛做的和下次在协和做的结果看起来离谱 (可能方法,参考范围,仪器不同)。医生也是一样,最好固定。不然每个医生不同想法 (不过想法一样就坏了),最后弄得患者一头雾水了。当然第二,第三位医生的会诊建议是不可以忽略的。

Tags:HBVDNA  
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